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Estudios de Histocompatibilidad

Estudios de Histocompatibilidad

Tipificación de los genes de clase I y II del complejo mayor de histocompatibilidad por biología molecular

El Complejo Mayor de Histocompatibilidad (CMH) es una región genética ubicada en el brazo corto del cromosoma 6 de los seres humanos que codifica para los llamados Antígenos HLA que fueron originariamente reconocidos por el papel que desempeñan al disparar la respuesta de células T que causa el rechazo del trasplante de tejidos.

Hay varios genes que integran el CMH. Los que tienen relevancia en la práctica clínica son los llamados genes HLA, que pueden ser de clase I o II según su estructura y función. Los "loci" o lugares que ocupan estos genes en el genoma humano están físicamente cerca entre sí. El conjunto de genes HLA que se ubica en cada uno de los cromosomas del par 6 y que se heredan en bloque se denomina Haplotipo HLA.

El sistema HLA es uno de los sistemas genéticos más polimórficos que se haya descripto. Se conocen cientos de alelos distribuidos en la población para la mayoría de cada uno de los loci HLA. Un individuo sólo porta dos de estas variantes para cada locus. La mayoría de las células humanas nucleadas presentan en su membrana por lo menos 12 antígenos HLA. Cada individuo porta los mismos doce antígenos en todas sus células. Los genes que los codifican son heredados como haplotipos completos de padres a hijos.

Metodología empleada

La tipificación de los genes HLA consiste en determinar cuáles de todas las variantes conocidas para un locus están presentes en un individuo. Hasta hace algunos años la tipificación HLA se realizaba con técnicas serológicas, utilizando sueros específicos contra los distintos antígenos HLA. Mediante este método se detectan los antígenos presentes en la membrana de los linfocitos estudiados. En la actualidad la tipificación se realiza utilizando técnicas de Biología Molecular, en la que se estudian los genes del individuo. Este método es mucho más específico que la serología y permite diferenciar alelos que eran imposibles de distinguir serológicamente. La tipificación por biología molecular de los genes HLA puede realizarse tanto con baja resolución (se diferencian los mismos alelos que nivel serológico) como con alta resolución (se define a nivel alélico cada loci estudiado).

Por rutina, en el PRICAI se utilizan sólo técnicas de biología molecular a nivel genómico para la tipificación de los siguientes loci:

  • HLA Clase I: Locus A, Locus B, Locus C (HLA-A, HLA-B, HLA-C)
  • HLA Clase II: Locus DRB1, DRB3, DRB4, DRB5, DQA, DQB, DPB (HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP)

Las técnicas de biología molecular utilizadas de rutina son:

  • SSP (Sequence Specific Primers): amplificación enzimática (PCR) con primers específicos para cada alelo que se deba identificar. Es una técnica rápida de mediana resolución, cuyo resultado se entrega en 24 horas.

  • SSOP (Sequence Specific Oligonucleotide Probes): amplificación enzimática (PCR) de la región polimórfica del locus que se deba estudiar (A, B, C, DR, DQ, DP), hibridación con oligonucleótidos marcados con fosfatasa alcalina y revelado con auto radiografía. Si bien es mas prolongada que la SSP permite lograr una tipificación de alta resolución.

  • Luminex: nueva metodología recientemente incorporada al servicio, que combina el beneficio de los análisis múltiples (Multiplex) con la sensibilidad de la citometría de flujo.
    Mediante este equipamiento de análisis automatizado, se puede estudiar simultáneamente el HLA de hasta 96 individuos con 100 diferentes sondas SSO marcadas para cada Locus, obteniendo así tipificaciones de mejor resolución en menos tiempo y para mayor número de muestras.
    Esta metodología es aplicable también a la detección de Anticuerpos en el suero de los receptores de órganos, estudios de autoinmunidad, y patologías cardíacas entre otros.

La tipificación HLA es uno de los aspectos en los que se basa la selección del donante para el trasplante renal. Cuanto mayor es el número de alelos HLA-A, B, C, DQ, DP y DRB idénticos entre donante y receptor, mayor es la sobrevida del injerto, especialmente en el primer año postrasplante.

La mayor parte de los trasplantes de médula ósea se realizan entre hermanos histoidénticos, es decir, iguales en todos los loci (HLA-A, B, C, DRB, DQB y DPB).

Para aquellos pacientes que no tienen donantes histocompatibles entre sus familiares, se puede iniciar una búsqueda nacional o internacional en los registros de donantes de medula ósea, para lo cual es necesario realizar la tipificación de los genes HLA del receptor con alta resolución.

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